凱氏定氮儀經過(guo)十幾年的不斷研發，自動蒸餾功能的ATN-300型號(hao)已(yi)經更(geng)新換代(dai)，變得更(geng)智能更(geng)好用，但是(shi)最(zui)近陸續碰到幾個

還用著10年前(qian)初代定氮(dan)儀的(de)客戶找我要說明書，經(jing)過(guo)一(yi)番尋(xun)找也算是找到(dao)了，如果(guo)有買過(guo)初代上海(hai)洪紀(ji)品牌(pai)的(de)ATN-300定氮(dan)儀的(de)客戶可以(yi)咨詢(xun)這篇文章(zhang)。

一、 概述

蛋白質(zhi)的測(ce)定方(fang)法(fa)，目前仍以1883年凱(kai)達爾氏(Kiedahl)發明的(de)(de)(de)定氮法為(wei)基礎(chu)，它根(gen)據各種蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)都具(ju)有(you)固定比數的(de)(de)(de)氮這一事實，通(tong)過對(dui)氮的(de)(de)(de)測定而推算(suan)(suan)出(chu)蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)含(han)量(liang)，此法所得的(de)(de)(de)含(han)氮量(liang)除(chu)了確定屬(shu)于蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)組成成分的(de)(de)(de)氮以外，還包(bao)括非蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)組成的(de)(de)(de)其(qi)他有(you)機及無(wu)機態(tai)氮，所以換(huan)算(suan)(suan)所得的(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)含(han)量(liang)稱作為(wei)粗蛋(dan)白(bai)含(han)量(liang)，一般蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)中的(de)(de)(de)含(han)量(liang)為(wei)18%，換算后即每6.25克蛋白(bai)質(zhi)中含(han)有1克(ke)氮，因此6.25成為換(huan)算系數K，但是不同的(de)(de)農(nong)產(chan)品(pin)(pin)及其(qi)制品(pin)(pin)的(de)(de)實際含氮量(liang)有區別(bie)，所以(yi)不同農(nong)產(chan)品(pin)(pin)必須采用不同的(de)(de)換算系數，如花生、大豆、蠶豆、大麥、小麥、燕麥、黑麥等含氮為17.6%，求(qiu)得K=5.7，蕎(qiao)麥、葵花籽、亞麻籽、棉花籽、蓖麻籽等換算系數則為K=5.50，玉米、菜籽(zi)為6.00，水(shui)稻為5.95，上述以外的(de)其他農產(chan)品(pin)的(de)換算系數均適用6.25。盡(jin)管(guan)如此，目前世界上還沒有(you)直接分離(li)測定含(han)蛋(dan)白質的可行(xing)方(fang)法。因此，迄今為止(zhi)在國內外凱氏(shi)定氮法仍(reng)然是測定蛋(dan)白質含(han)量的經典方(fang)法。所得(de)結果(guo)準確(que)、穩定。

我公司研制生產(chan)的ATN-300型全自動定(ding)(ding)氮儀（蛋白(bai)質測(ce)定(ding)(ding)儀），是引進消化吸收國內(nei)外(wai)檢測(ce)新(xin)技術，結合我國國情，應用凱氏定(ding)(ding)氮法原理(li)(li)，采用化學與物理(li)(li)學相結合完成(cheng)的成(cheng)套蛋白(bai)質含(han)量快速測(ce)定(ding)(ding)裝置。為糧食(shi)、食(shi)品、飼料、農(nong)業、商檢等(deng)檢測(ce)部門提供了理(li)(li)想的檢測(ce)設備(bei)。

二、 工作原理

ATN-300型(xing)全自動定(ding)氮儀檢測原理(li)為(wei)：

整套裝置，由(you)電加(jia)熱消化器、全自動蒸(zheng)餾器兩部分組成(cheng)。要(yao)提高(gao)蛋(dan)白質含量測定的(de)檢測速度(du)，其關鍵是要(yao)加(jia)速樣品消化煮解的(de)時間，ATN-300型全自動定氮(dan)儀消(xiao)化裝置采用(yong)井式電加(jia)熱爐，增大了消(xiao)化管受熱面，使消(xiao)化管連同(tong)管內所(suo)注(zhu)入的10ml H₂SO₄及試樣(yang)置入(ru)消化管插入(ru)井式(shi)爐內加熱取得更佳的熱效應，在消化前置入(ru)硒片作為催(cui)化劑進(jin)一步加速(su)消化煮解，大大縮短消化時(shi)間。消化管內溢出的SO₂等有(you)(you)害氣(qi)(qi)體(ti)(ti)，通(tong)過消(xiao)化管上的排污管經(jing)抽(chou)吸泵由(you)水帶(dai)入下水道(dao)，有(you)(you)效的抑制有(you)(you)害氣(qi)(qi)體(ti)(ti)的外逸，由(you)省略(lve)了實(shi)驗室中(zhong)安裝毒(du)氣(qi)(qi)通(tong)風(feng)櫥，試樣經(jing)40分鐘左右消化(hua)煮解，即可消化。

消化的過程主(zhu)要反(fan)應如下：

R·C·H·NH2·COOH + H₂SO₄ → CO₂ + SO₂ + NH₃ + H₂O

2NH₃ + H₂SO₄ → (NH₄)₂SO₄

蒸(zheng)餾與吸收過程的(de)主要反應如下：

(NH₄)₂SO₄ + 2NaOH → Na₂SO₄ + 2NH₃ + 2H₂O

NH₃ + 4H₃BO₃ → NH₄HB₃O₇ + 5H₂O

然后經滴定，計算蛋白質(zhi)含(han)量，滴定的(de)過程是鹽酸和硼酸氫銨反(fan)映的(de)過程。

NH₄HB₃O₇ + HCl + 5H₂O → NH₄Cl + 4 H₃BO₃

三、 技(ji)術參數

1． 測定品(pin)(pin)種：糧(liang)食(shi)、食(shi)品(pin)(pin)、飼料、釀造、土壤、制(zhi)糖、乳制(zhi)品(pin)(pin)、藥(yao)物等物質

2． 測定樣品量：固體＜5g/個，液體＜15ml/個

3． 測定范(fan)圍：含氮量0.1~200mg  (0.02%~95%)

4． 測定數量：消化(hua)：一次同時(shi)消化(hua)個數按爐孔數定；單個蒸餾

5． 測定(ding)時間：消化(hua)每批45min；蒸(zheng)餾每(mei)個6min

6． 測定重現性：平行試驗結果符合GB/T 6423-94

7． 電源：220V，50Hz

四、 使用(yong)說明

1． 其他儀器和用具

1．1分(fen)析(xi)天平：感量0.0001g

1．2實驗(yan)室用粉碎機或研缽

1．3酸式滴定管：25ml或(huo)10ml

1．4錐形瓶：容積250ml

1．5分樣篩：孔徑(jing)0.45mm(40目(mu))

2．試劑(ji)

2．1鹽酸(HCl)：分析(xi)純(chun)(GB622) 0.05mol/L標準(zhun)液，(4.2ml鹽酸，注(zhu)入(ru)1000ml蒸餾(liu)水)碳酸(suan)鈉(na)法標定鹽酸(suan)。

2．2氫氧化(hua)鈉(NaOH)：化學純或工業純(GB629)、40g溶于(yu)蒸餾水(shui)中溶成100ml，配成(cheng)40%水溶液(m/v)。

2．3硼(peng)酸(suan)(H₃BO₃)：分析純(GB628)2g，溶于蒸餾水中配成100ml2%水溶(rong)液(m/v).

2．4混合指示劑：甲基(ji)紅(G₅H₁₅N₃O₂)(HG3-958)溶于(yu)乙醇配(pei)成0.1%乙醇溶(rong)液，溴甲酚綠(HG3-1220)溶(rong)于乙醇(chun)配成0.5%乙醇溶液，二種(zhong)溶液等體積混合，陰涼處保存(cun)(保存期三個月(yue)以內)。

2．5硫酸銅(CuSO₄·5H₂O)分析純(GB655)10g；硫酸(suan)鉀(K₂SO₄) (HG3-920)分析純150g，在研缽中研磨，仔細(xi)混勻后(hou)過40目篩(shai)(加速劑(ji))。

2．6濃硫酸(suan)(H₂SO₄)化(hua)學純(GB625)(含量98%、無氮(dan))。

3．操(cao)作方法

3．1樣品(pin)消(xiao)化

稱取經粉碎通過40-60目/寸試樣(yang)0.5-1g(視含量而定)無損(sun)的置(zhi)入已洗(xi)滌(di)烘(hong)干的試管中加催化劑(ji)5g左右和10ml左右硫酸。

將消(xiao)化管(guan)分別放入消(xiao)化架各個孔內，然后置于消(xiao)化爐上(shang)，開啟抽氣(qi)三(san)通上(shang)連(lian)接的自來(lai)水龍頭，使抽氣(qi)三(san)通處于吸(xi)氣(qi)狀態。接通電(dian)源，在加熱初始階(jie)段需注意(yi)觀測，防止試樣因急沸而飛(fei)濺(jian)。(初化時，選用(yong)電壓型(xing)控溫消化爐(lu)起初控制在150V左(zuo)右，15分鐘左右后可滿電壓工作；選用數顯型消(xiao)化爐起初控制在(zai)200度(du)左右，20分鐘左右(you)后再設(she)定所需溫度。)

消化結束(shu)后（消化液呈澄清透明狀），將消化管架移至冷(leng)卻(que)架冷(leng)卻(que)至40-50度左(zuo)右(you)。然后(hou)進行下一步的蒸餾。

3．2蒸(zheng)餾

1、 用配(pei)套橡膠管根(gen)據(ju)結構圖和儀(yi)器側面標簽(qian)提示連(lian)好管路。

2、 （各參數(shu)數(shu)值設定(ding)）必(bi)須按住啟(qi)動鍵(jian)打開側面電源開關，按啟(qi)動鍵(jian)，測定(ding)酸泵、水泵、堿泵的流量參數(shu)，按下一項鍵(jian)，在(zai)右邊托盤上接收瓶(ping)，接著(zhu)按加酸按鍵(jian)，液晶屏上顯示4秒左(zuo)右時(shi)(shi)，再(zai)按此鍵(jian)就關閉了酸泵，此時(shi)(shi)取下(xia)接(jie)收(shou)瓶倒掉(diao)液(ye)體(ti)（主要是防止管(guan)路中(zhong)空氣導(dao)致加(jia)(jia)(jia)液(ye)不準(zhun)），接(jie)著重復上(shang)面加(jia)(jia)(jia)液(ye)工作，停止后(hou)，取下(xia)接(jie)收(shou)瓶用(yong)(yong)量(liang)筒量(liang)出數值，計(ji)算(suan)出每秒加(jia)(jia)(jia)酸的量(liang)，在自動加(jia)(jia)(jia)液(ye)時(shi)(shi)只(zhi)要輸入時(shi)(shi)間就可(ke)知道加(jia)(jia)(jia)了多少液(ye)體(ti)量(liang)（根據實驗(yan)需要量(liang)設定），加(jia)(jia)(jia)堿、加(jia)(jia)(jia)蒸(zheng)餾水(shui)在左(zuo)邊放(fang)上(shang)消化管(guan)，加(jia)(jia)(jia)量(liang)及(ji)計(ji)算(suan)的方法(fa)同上(shang)。液(ye)晶屏提示：設定加(jia)(jia)(jia)酸時(shi)(shi)間（毫秒為單(dan)位），根據實驗(yan)需要量(liang)而(er)設定好，加(jia)(jia)(jia)堿、加(jia)(jia)(jia)蒸(zheng)餾水(shui)方法(fa)同上(shang)（秒為單(dan)位）。（一(yi)般加(jia)(jia)(jia)堿量(liang)是消化時(shi)(shi)濃硫(liu)酸用(yong)(yong)量(liang)的5倍以上，蒸餾水是(shi)15ml，硼酸(suan)50ml），按下一(yi)項鍵(jian)同時按住啟動(dong)鍵(jian)恢復正常畫(hua)面（各泵流量(liang)已知），此過程只要(yao)操作一(yi)次就可以，以后(hou)都不用再操作此過程。

3、 正(zheng)常工(gong)作之(zhi)一（設(she)定過程(cheng)）畫(hua)面

液晶屏提示，有1、2、3、4，四個(ge)存(cun)儲編(bian)號（代表可(ke)存(cun)儲4個操作程序）

選好存儲樣(yang)品編號，液(ye)晶屏(ping)提示檢(jian)查、設(she)定

用下一項(xiang)鍵(jian)（上(shang)一項(xiang)鍵(jian)）可選擇所需程序

如選設定(ding)可(ke)設定(ding)各個(ge)參數（注意：每次(ci)開(kai)機只能(neng)設定(ding)一個(ge)存儲程序編號參數）

A、根據提示設(she)定開啟電磁閥的時間值(zhi)，請用(yong)上升或(huo)下降和下一(yi)項鍵(jian)和（上一(yi)項鍵(jian)）調(diao)（出廠時設(she)定48秒以上，請不要小(xiao)于40秒以免燒保險絲(si)），接著根據提(ti)示設(she)定(ding)蒸汽(qi)穩定(ding)的時間數(shu)值，方法同上（出廠時設(she)定(ding)60秒(miao)以上，請不要小(xiao)于(yu)50秒以免燒保險絲）；根(gen)據(ju)提示設(she)定各個(ge)泵參數（泵流(liu)量前面已經測(ce)算過），根(gen)據(ju)提示設(she)定報警定時(shi)器時(shi)間方法(fa)同上，（出廠時(shi)設(she)定420秒）。

B、如選(xuan)檢查(cha)(cha)可以檢查(cha)(cha)設定參(can)數，再按(an)下一(yi)項鍵，進入正常(chang)畫面(mian)，按(an)啟動(dong)鍵，開始工(gong)(gong)作，直到(dao)顯(xian)示請選(xuan)擇工(gong)(gong)作模式畫面(mian)時(shi)。

液(ye)晶(jing)屏顯示自動還是手動

在選用自(zi)動(dong)工作模式時（手動(dong)模式同樣(yang)），按(an)一下啟動(dong)按(an)鍵(jian)，再(zai)打(da)開自(zi)來水龍(long)頭(tou)，

這時夾(jia)緊側面排水夾(jia)子，下方有機玻(bo)璃窗口(kou)(kou)里玻(bo)璃瓶內有水進入即可(ke)，過一段時間(jian)后，下方有機玻(bo)璃瓶窗口(kou)(kou)里玻(bo)璃瓶有水進入，液晶屏提(ti)示電磁閥關閉，同(tong)時時間(jian)減少(shao)顯示為0，顯(xian)示電磁閥開，液晶屏顯(xian)示蒸汽穩(wen)定的時(shi)間數，同時(shi)時(shi)間減(jian)少顯(xian)示到(dao)0，并發出蜂(feng)鳴聲(sheng)，顯示蒸(zheng)汽穩定。這時關(guan)閉右側(ce)蒸(zheng)汽開關(guan)，提起左(zuo)側(ce)紅色(se)手柄把消化管固定在左(zuo)邊(bian)的托(tuo)架上，在右邊(bian)托(tuo)盤放上250ml的接收(shou)瓶，（手動模(mo)式時，根據順序按(an)(an)(an)(an)各(ge)(ge)個按(an)(an)(an)(an)鍵(jian)(jian)(jian)加入各(ge)(ge)種液體(ti)后(hou)(hou)）再按(an)(an)(an)(an)啟動按(an)(an)(an)(an)鍵(jian)(jian)(jian)，按(an)(an)(an)(an)順序自動加入各(ge)(ge)種液體(ti)（按(an)(an)(an)(an)照程序設定值），完成好后(hou)(hou)，打開(kai)右側蒸汽開(kai)關，再按(an)(an)(an)(an)啟動按(an)(an)(an)(an)鍵(jian)(jian)(jian)，液晶屏顯(xian)示報警定時器時間，數(shu)值減為0時發出蜂鳴(ming)聲。可(ke)觀(guan)察接(jie)收液數量是否達(da)到（一般接(jie)收瓶內(nei)液體要達(da)到150ml以上），接著移(yi)下(xia)接收瓶，這時關閉右側蒸汽開(kai)關，取下(xia)樣品(pin)待滴定用。第二(er)個(ge)樣品(pin)同上方法(fa)。

4、 關機

關(guan)閉電源，關(guan)水(shui)龍頭，打(da)開側面(mian)排水(shui)夾子(zi)，關(guan)閉右側蒸(zheng)(zheng)(zheng)汽(qi)開關(guan)，把連堿(jian)泵的(de)膠管(guan)放入蒸(zheng)(zheng)(zheng)餾水(shui)容器內(nei)，前面(mian)放入消(xiao)化管(guan)，等(deng)排完水(shui)。關(guan)一次開關(guan)，再按(an)住啟動鍵(jian)打(da)開側面(mian)電源開關(guan)用手(shou)動模式按(an)加堿(jian)鍵(jian)抽蒸(zheng)(zheng)(zheng)餾水(shui)清洗堿(jian)泵，酸泵同樣清洗，關(guan)電結束。

3．3滴定

用標(biao)定(ding)(ding)后的鹽酸(suan)溶(rong)(rong)液(ye)進行滴定(ding)(ding)接收瓶內的溶(rong)(rong)液(ye)，滴定(ding)(ding)溶(rong)(rong)液(ye)由綠色變為淡紫色為終點(dian)，記下消耗鹽酸(suan)溶(rong)(rong)液(ye)的毫升數(shu)，按下式計算蛋白含量：

式中：V₂—滴定試樣時(shi)消耗酸標準溶液的體(ti)積 (ml)

      V₁—滴(di)定空(kong)白(bai)時(shi)消耗酸標準溶液的體積 (ml)

      C—標準(zhun)酸溶液的摩爾濃度

      0.014—氮的毫克當量數

      K—氮換算成粗蛋白質的系數

      W—試樣重量 (g)

(空(kong)白(bai)測定(ding)：用0.1克糖代替(ti)樣品或不加樣品做空白(bai)測定)

平(ping)行(xing)測定(ding)的(de)結果用算(suan)術平(ping)均值表(biao)示(shi)，保(bao)留(liu)小數后二位(wei)。

3．4 換算系數

結(jie)果報告中必須注明氮換(huan)算成粗(cu)蛋白質的系(xi)數(shu)，換(huan)算系(xi)數(shu)見(jian)下(xia)表。

3．5注意事項

1．消(xiao)化(hua)時若有(you)氣體外溢，加大抽氣三(san)通(tong)連(lian)接(jie)的(de)自(zi)來頭的(de)壓力(li)。消(xiao)化(hua)密封圈每次試驗(yan)結(jie)束后清(qing)洗一遍延(yan)長使用壽(shou)命。

2．每天工(gong)作完，把NaOH溶(rong)液外接的(de)皮管移入蒸(zheng)餾水瓶(ping)內，前面套好消化管抽洗(xi)幾次(ci)(ci)，防止(zhi)堿(jian)液殘留在堿(jian)泵內而影響使用壽命(ming)，也可(ke)防止(zhi)單向閥粘連，待下(xia)次(ci)(ci)使用時，在蒸(zheng)餾樣品前需先(xian)排出100mlNaOH，以防稀(xi)釋NaOH，造成第一個樣品加入的堿液濃度不夠。

3．每次試(shi)樣蒸餾結束，必(bi)須(xu)迅(xun)速取下(xia)消(xiao)化管，防止(zhi)消(xiao)化管液體(ti)倒(dao)吸至蒸發爐(lu)內腐蝕(shi)電熱管。

4．用(yong)戶在(zai)遵(zun)守本儀器(qi)的(de)運輸、貯(zhu)存、安裝、調(diao)整和(he)使用(yong)規(gui)程的(de)條(tiao)件(jian)下，如發(fa)(fa)現(xian)儀器(qi)因制造質量問(wen)題而不能正常工作時(shi)，從(cong)收獲之(zhi)日(ri)起一(yi)年內實行(xing)三包(bao)；或開(kai)箱(xiang)(xiang)時(shi)發(fa)(fa)現(xian)包(bao)裝不良而發(fa)(fa)生(sheng)損壞，附件(jian)與(yu)(yu)裝箱(xiang)(xiang)單不符，短缺零(ling)件(jian)等(deng)情(qing)況，請(qing)與(yu)(yu)我(wo)公(gong)司質檢部(bu)門聯系(xi)。來函(han)注明(ming)產品型號、編號和(he)出廠日(ri)期。本儀器(qi)使用(yong)時(shi)，要求(qiu)用(yong)戶嚴格按照說明(ming)誰規(gui)定進行(xing)，如有(you)疑問(wen)或對結構改進的(de)意見，請(qing)來函(han)告知我(wo)公(gong)司質檢部(bu)門。